Turbo 感受态细胞
产品特性
| 产品名称： | Turbo 感受态细胞 |
| 单位： | 支 |
| 规格： | 10×100 μl / 20×100 μl |
| 运输条件： | 干冰 |
| 基因型： | F'proA+B+lacIqΔlacZM15/fhuA2Δ(lac-proAB)glnVgalK16galE15R(zgb-210::Tn10)TetSendA1thi-1Δ(hsdS- mcrB)5 |
| 菌株抗性： | 对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素敏感。 |
| 储存条件： | -70℃保存，运输为干冰包装。-70℃保存至少 6 个月，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。 |
产品简介
本公司生产的 Turbo 感受态细胞是采用大肠杆菌 Turbo 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。Turbo 菌株是生长最快的大肠杆菌菌株，菌株平板上 6.5 小时可见克隆，摇菌 4-6 小时可提取质粒。核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒 DNA 的产量和质量。菌株的 LacIq 基因的表达受到严格控制，可克隆毒性基因。ΔlacZM15 基因的存在可用于蓝白斑筛选。菌株还具有抗 T1 噬菌体感染的特点。Turbo 感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率大于 109 cfu/μg DNA。
操作方法
（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μL 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。
2. 冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。
3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动。
4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。
5. 加入 500μL 的室温的 SOC 或 LB 培养基。
6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养 60 分钟。
7. 取 50-100μL 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养12-24 小时。
（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μL 左右的液体，用 200μL 吸头轻轻吹打散菌块， 取 10μL 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落，此方法主要适用于质粒转化，连接产物转化最好用涂布法。）
（质粒快速转化步骤：将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟，对于氨苄青霉素抗性的质粒，步骤 4 完成后，可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。）
注意事项
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
