Tuner(DE3) 感受态细胞
产品特性
| 产品名称： | Tuner(DE3) 感受态细胞 |
| 单位： | 支 |
| 规格： | 10×100 μl / 20×100 μl |
| 运输条件： | 干冰 |
| 基因型： | F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcmlacY1 (DE3) |
| 菌株抗性： | 对氨苄青霉素，卡那霉素，氯霉素和四环素敏感。 |
| 储存条件： | -70℃保存，运输为干冰包装。-70℃保存至少 6 个月，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。 |
产品简介
Tuner(DE3)为 LacYZ 突变型 BL21(DE3)菌株。Tuner(DE3)菌株可利用 IPTG 的加入量来精准地控制重组蛋白的表达量，与 pET 系列载体联合使用，可以使得蛋白表达从低表达水平到高表达水平进行有效调控（使用低浓度的 IPTG 诱导重组蛋白低水平表达时，目的蛋白可能会具有更好的可溶性和生物活性）。该菌株含有λ噬菌体 DE3 区，可以表达 T7 RNA 聚合酶。Tuner(DE3)菌株属于B 菌株，lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型。Tuner(DE3)感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19 质粒检测转化效率达 107 cfu/μg DNA。
操作方法
（以氨苄青霉素抗性的 pET 质粒为例，以下操作均按无菌条件的标准进行）
1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μL 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。
2. 冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。
3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动。
4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。
5. 加入 500μL 的室温的 SOC 或 LB 培养基。
6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养 60 分钟。
7. 取 50-100μL 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养12-24 小时。
（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μL 左右的液体，用 200μL 吸头轻轻吹打散菌块， 取 10μL 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落）。
注意事项
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
