Tuner(DE3) 感受态细胞

操作方法

（以氨苄青霉素抗性的 pET 质粒为例，以下操作均按无菌条件的标准进行）
1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μL 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。
2. 冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。
3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动。
4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。
5. 加入 500μL 的室温的 SOC 或 LB 培养基。
6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养 60 分钟。
7. 取 50-100μL 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养12-24 小时。
（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μL 左右的液体，用 200μL 吸头轻轻吹打散菌块， 取 10μL 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落）。