TaqMan One Step RT-qPCR Kit（Probe qRT-PCR）

试剂原理

TaqMan One Step RT-qPCR kit首先利用反转录酶RTase将RNA反转录成cDNA，再以cDNA为模板通过热启动DNA扩增酶在单管闭管反应体系中连续进行PCR扩增反应，利用荧光标记探针（Probe）水解发光，并对发光信号进行检测。
1. RT-PCR
首先采用反转录酶以RNA为模板合成 cDNA，然后再以合成的cDNA为模板，经过PCR扩增反应的热变性、引物退火、链延伸三个步骤循环往复，在短时间内扩增得到大量DNA片段。
2. 荧光检出
TaqMan 探针法是使用 5’端带有荧光物质，3’端带有淬灭物质的 TaqMan 探针进行荧光检测的方法。在探针没有被 Taq 酶分解时，5’端的荧光物质受到 3’端淬灭物质的制约，不能发出荧光。而当 TaqMan探针被分解后，5’端的荧光物质便会游离出来，发出荧光。在 PCR 反应液中加入荧光探针后的退火过程中，荧光探针便会和模板配对区域结合。在 PCR 反应的延伸过程中，Taq DNA 聚合酶的 5’→3’核酸外切酶活性可以分解和模板杂交的荧光探针，游离出的荧光物质便会发出荧光。通过检测反应体系中的荧光强度，可以达到检测 PCR 产物扩增量的目的。