产品概述
Taq Plus DNA Ploymerase 是 Taq 酶和 Pfu 酶的混合物,既有 5’→ 3’核酸外切酶活性,又有 3’→5’核酸外切酶活性。Taq Plus DNA Ploymerase 兼具 Taq DNA Ploymerase 的高效率及 Pfu DNA Ploymerase 的高保真性的特点。与 Taq 酶相比,Taq Plus DNA Ploymerase 具有扩增长度增加(对模板有效扩增长度可达 10kb)、保真度好等优点;与 Pfu 酶相比,具有扩增速度快、反应效率高的优势。常用于一些对保真度要求高和模板结构复杂(如GC 含量高、有二级结构等)的 PCR 扩增。其 PCR 产物可直接进行 TA 克隆,如需提高克隆效率,建议先纯化,加 A 后再进行 TA 克隆。
适用范围
用于 DNA 的高保真扩增,如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析(SNP)和末端补平等。
建议 PCR 体系(以 50μl 反应体系为例)
Template <0.5μg
上游引物(10μM) 1μl
下游引物(10μM) 1μl
10×Buffer(含 Mg2+) 5μl
dNTP(各 2.5mM) 4μl
Taq plus DNA Polymerase 0.5-1μl
ddH2O up to 50μl
注意事项
1、PCR 反应体系加样时,最后一步加入 Taq Plus DNA Ploymerase,整个过程宜在冰上操作。
2、取 Taq DNA Ploymerase 做 PCR 反应时,请用高压灭菌处理过的吸头。
3、10×Taq Plus Buffer 中含 15 mM Mg2+,如 PCR 反应需要较高 Mg2+浓度,请另行加入。
4、一般情况下,Taq Plus DNA Ploymerase 可以很好地扩增 10kb 以下的片段。能否成功扩增更长的片段,主要与模板的结构和引物的设计有关,如果扩增长片段有困难,最好选用 Long Taq DNA Ploymerase。