T7pLysY 感受态细胞
产品特性
| 产品名称： | T7pLysY 感受态细胞 |
| 单位： | 支 |
| 规格： | 10×100 μl / 20×100 μl |
| 运输条件： | 干冰 |
| 基因型： | fhuA2lacZ::T7gene1[lon]ompTgalsulA11R(mcr-73::miniTn10–TetS )2[dcm]R(zgb-210::Tn10–TetS )endA1D(mcr C-mrr)114::IS10 lysY (CamR) |
| 菌株抗性： | 对氨苄青霉素，壮观霉素，卡那霉素，链霉素和四环素敏感，对氯霉素有抗性。 |
| 储存条件： | -70℃保存，运输为干冰包装。-70℃保存至少 6 个月，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。 |
产品简介
T7pLysY 菌株为大肠杆菌 BL21 增强型菌株，为 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型，用于毒性或非毒性蛋白的表达。该菌株区别于 BL21(DE3)pLysS 和 BL21(DE3)pLysE 菌株的优势在于 T7 RNA 聚合酶基因整合在细菌染色体上的 lac 操纵子区域，基因组中无λ前噬菌体序列，LysY 表达的 T7 溶菌酶保留了对 T7 RNA 聚合酶的抑制作用但缺失了水解细胞壁的酰胺酶活性，有利于降低基因的背景表达和避免诱导过程中细菌的裂解，菌株具有抗 T1 噬菌体感染等特点。T7pLysY 表达感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率大于 108 cfu/μg。
操作方法
（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μL 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。
2. 冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。
3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动。
4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。
5. 加入 500μL 的室温的 SOC 或 LB 培养基。
6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养 60 分钟。
7. 取 50-100μL 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养12-24 小时。
（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μL 左右的液体，用 200μL 吸头轻轻吹打散菌块， 取 10μL 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落，此方法主要适用于质粒转化，连接产物转化最好用涂布法。）
（质粒快速转化步骤：将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟，对于氨苄青霉素抗性的质粒，步骤 4 完成后，可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。）
注意事项
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
