Stbl4 感受态细胞

操作方法

（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒 DNA 或 5-10μL 连接产物到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀；
2. 冰水浴中放置 15-30 分钟，不要晃动；
3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动；
4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动；
5. 加入 500μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基；
6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟；
7. 取 50-100μL 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。
（当克隆不稳定片段时，为了降低重组错误率，复苏培养和涂布培养最好采用 30℃的培养条件，平板在 30℃培养时需要 24 小时左右。）
（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μL 吸头轻轻吹打散菌块，取 10μL 重悬的菌液分多点滴在抗性 LB 平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。37℃培养过夜。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）