OverExpressC43(DE3) 感受态细胞
产品特性
| 产品名称： | OverExpressC43(DE3) 感受态细胞 |
| 单位： | 支 |
| 规格： | 10×100 μl / 20×100 μl |
| 运输条件： | 干冰 |
| 基因型： | F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3) |
| 菌株抗性： | 对氨苄青霉素，卡那霉素，氯霉素和四环素敏感。 |
| 储存条件： | -70℃保存，运输为干冰包装。-70℃保存至少 6 个月，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。 |
产品简介
OverExpressC43(DE3) 菌株适用于毒性蛋白的表达，来源于 OverExpressC41(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)是通过毒性蛋白在 BL21(DE3)内过表达筛选实验得到的基因突变菌株,该菌株的基因突变降低了 T7 RNA 聚合酶的酶活性，下调毒性蛋白的表达量使细胞存活。OverExpressC43(DE3)菌株是通过另一个毒性蛋白对 OverExpress C41(DE3)菌株再次进行毒性耐受性实验获得的，OverExpress C43(DE3)菌株比 OverExpress C41(DE3)更加耐受毒性蛋白。OverExpress C43(DE3)菌株也可以表达常规蛋白，相同条件 下，蛋白表达量略低于 BL21(DE3)菌株。OverExpressC43(DE3)菌株属于 B 菌株，lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型。OverExpress C43(DE3) 感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19 质粒检测转化效率可达 1×107 cfu/μg DNA。
操作方法
1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100μl 感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的 DNA 的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置 30 分钟。
3、将离心管置于 42℃水浴中 60-90 秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，注意不要摇动离心管。
4、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的 SOC 或 LB 培养基，37℃ 180rpm 振荡培养 1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培养 12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的 DNA 总量较多，可取 100ul 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA 总量较少，可取 200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事项
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
