His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型)（品牌：碧云天）

产品特性        

碧云天生产的His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型)(His-tag Protein Purification Kit)，俗称镍柱试剂盒，是一种采用了新型的
BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)的可以兼容还原剂和螯合剂，并能简单、快速、高效并且高特异性地纯化His标签蛋白的试剂盒。
试剂盒提供了His标签蛋白所需的相关试剂和亲和层析柱空柱管，为His标签蛋白的纯化带来了极大的便利。
通常带有6个组氨酸标签的重组蛋白(6X His-tagged recombinant protein)或带有6个以上连续组氨酸标签的重组蛋白，被称为His标签蛋白。蛋白样品溶液通过BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)时，重组蛋白His标签上的组氨酸残基能特异性地结合到BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)中的镍离子上，其它蛋白则不能被结合。洗涤后，His标签重组蛋白可在非变性条件下被洗脱，从而被分离纯化。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)对His标签重组蛋白的亲和力强、选择性高、结合容量大，可以获得高纯度的His标签重组蛋白，可用于简单、快速、高效地纯化细菌、哺乳动物细胞、昆虫及杆状病毒等多种表达系统中表达的His标签重组蛋白。纯化的蛋白可以用于结构和功能研究、抗体制备、蛋白与蛋白相互作用、蛋白与核酸相互作用等方面的研究。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)采用了一种高度交联的6%琼脂糖凝胶(Beyorose™ CL-6B，与Sepharose CL-6B性能基本一致)为基质，并使用了进一步优化的接臂和镍离子螯合技术，和目前市售的大多数Ni-NTA agarose或类似产品相比，非特异性蛋白结合显著降低，耐受压力强，镍离子螯合非常稳定。和同类产品相比，本产品由于镍离子基本不会流失，重复使用本纯化介质时不需要重新装载镍离子。
Ni-NTA agarose以及绝大多数类似的镍柱产品不能耐受蛋白样品中常见浓度的还原剂如二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇等以及常见浓度的螯合剂如EDTA等，但BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)可以很好地耐受DTT等还原剂以及EDTA等螯合剂。本产品可耐受20mM DTT等还原剂，以及20mM EDTA等螯合剂。这为需要添加还原剂或螯合剂的蛋白样品的纯化提供了可能性。本产品不兼容8M尿素和6M盐酸胍。对于包涵体蛋白的纯化，在采用8M尿素或6M盐酸胍溶解蛋白的情况下，需要通过透析去除尿素和盐酸胍后才能使用本产品进行His标签蛋白的纯化。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)已经螯合了镍离子，呈蓝色，凝胶的颗粒直径为45-165μm。可耐受的最大压力为0.025MPa，约合5.8psi。采用固定流速进行蛋白纯化时的推荐流速为0.5ml/min。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)可以高容量、高特异性地结合His标签蛋白。最大蛋白结合量为20-30mg蛋白/毫升凝胶。实际使用时的最大结合量取决于待纯化的His标签重组蛋白的分子量大小，分子量越大则最大结合容量越大，分子量越小则最大结合容量越小。对于分子量为50kD的蛋白，每毫升凝胶的实际最大纯化量约为6-10mg，对于分子量为100kD的蛋白，每毫升凝胶的实际最大纯化量约为12-20mg。但对于分子量相同的蛋白，也会因为蛋白本身特性的不同，结合的最大容量也会有所不同。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)储存在30%乙醇中，10ml总体积中5ml为凝胶，5ml为液体，需要充分重悬后再吸取。
一个包装的本产品足够进行10次His标签重组蛋白纯化，每次细菌沉淀的湿重约为1克。每次蛋白的最大纯化量为10-15mg，具体的最大纯化量和蛋白分子量有关；对于分子量为50kD的带有His标签重组蛋白，每次的蛋白最大纯化量为3-10mg。在不使用亲和层析柱空柱管的情况下，参考本说明书本试剂盒足够进行500次的小量His标签蛋白纯化。
包装清单：

保存条件：
4℃保存，至少一年有效。除BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)外，其余均可以-20℃保存。
注意事项：
请勿在-20℃或更低温度冷冻保存BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)。 
如果裂解液或镍柱平衡液中含有DTT等还原试剂，建议预先使用10-20个柱体积的非变性裂解液(配制方法附后)洗涤镍柱，以充分去除可能残留的自由镍离子，并使用含有 DTT等还原剂的裂解液或平衡液平衡镍柱后再继续使用。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)。使用过程中，缓冲试剂如Tris、HEPES、MOPS等的浓度不宜超过100mM，EDTA浓度不宜超过20mM，SDS和sarkosyl的浓度不宜超过0.3%，Triton、Tween、NP-40的浓度不宜超过2%，脱氧胆酸钠、CHAPS的浓度不宜超过1%，组氨酸浓度不宜超过20mM，钙离子浓度不宜超过5mM，钠离子和镁离子浓度可以高达2M，甘油浓度可以高达50%。其它未提及试剂的兼容性可以参考上述试剂，但还有待实验验证。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型)保存和纯化过程中应始终保持凝胶湿润。
若离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。
蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解。为有效抑制蛋白降解，可以在裂解液中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物。
若使用本说明书提供的条件无法达到理想的纯化效果，可尝试改变洗涤液和洗脱液中咪唑的浓度和(或)pH，以达到最优效果。
如果目的蛋白纯化必须使用变性剂，推荐使用碧云天生产的P2229S His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。