DB3.1 感受态细胞

操作方法

（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1. 取感受态细胞置于冰浴中。
2. 向感受态细胞悬液中加入目的 DNA ( 100μl 的感受态细胞能够被 1ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。
3. 将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒钟，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2 分钟，该过程不要摇动离心管。
4. 向每个离心管中加入 500μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 150rpm，摇床振荡培养 60 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5. 无菌条件下，取适量菌液加到含相应抗生素的 LB 固体培养基平板上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。