DB3.1 感受态细胞
产品特性
| 产品名称： | DB3.1 感受态细胞 |
| 单位： | 支 |
| 规格： | 10×100 μl / 20×100 μl |
| 运输条件： | 干冰 |
| 基因型： | F-gyrA462endA1Δ(sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)supE44ara-14galK2lacY1proA2rpsL20(SmR)xyl-5λ-leumtl1 |
| 菌株抗性： | 细胞具有链霉素抗性。 |
| 储存条件： | -70℃保存，运输为干冰包装。-70℃保存至少 6 个月，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。 |
产品简介
本公司生产的大肠杆菌 DB3.1 细胞含有 gyrA462 基因，对λ噬菌体的 ccdB 基因产物的毒性具有抵抗作用，特别适用于转化和扩增包含 ccdB 基因的质粒载体。使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 107 cfu/µg。
操作方法
（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1. 取感受态细胞置于冰浴中。
2. 向感受态细胞悬液中加入目的 DNA ( 100μl 的感受态细胞能够被 1ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。
3. 将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒钟，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2 分钟，该过程不要摇动离心管。
4. 向每个离心管中加入 500μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 150rpm，摇床振荡培养 60 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5. 无菌条件下，取适量菌液加到含相应抗生素的 LB 固体培养基平板上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。
注意事项
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
