BJ5183-AD-1 感受态细胞
产品特性
| 产品名称： | BJ5183-AD-1 感受态细胞 |
| 单位： | 支 |
| 规格： | 10×100 μl / 20×100 μl |
| 运输条件： | 干冰 |
| 基因型： | endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR) [pAdEasy-1 (AmpR)] |
| 菌株抗性： | 对卡那霉素敏感，有链霉素和氨苄青霉素抗性。 |
| 储存条件： | -70℃保存，运输为干冰包装。-70℃保存至少 6 个月，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。 |
产品简介
BJ5183-AD-1 菌株携带的 pAdEasy-1 质粒包含了大部分人腺病毒 5 型的基因组序列（E1/E3 基因缺失），表达可供 pAdEasy-1 骨架质粒和 pAdEasy 穿梭质粒进行同源重组的所有组分，产生重组腺病毒质粒。pAdEasy-1 为 33.5kb，具有氨苄青霉素抗性，一旦与穿梭载体重组，其抗性消失。卡那霉素抗性的 pAdTrack-CMV 质粒检测感受态细胞的转化效率大于 103 cfu/μg。
操作方法
（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入目的质粒（含有目的基因并线性化）到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀；
2. 冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动；
3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动；
4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动；
5. 加入 500μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基；
6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟；
7. 取 50-100μL 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。
（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μL 左右的液体，用 200μL 吸头轻轻吹打散菌块，取 10μL 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）
注意事项
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
