2× ExSembly™ Cloning Master Mix
产品特性
产品名称：
2× ExSembly™ Cloning Master Mix
规格：
10 rxn
产品包装：
100 μL 两倍反应混合物
储存：
储存在零下20 度。 避免反复冻融。
应用：
1、快速基因克隆
2、定点基因突变
实验准备工作：
开始克隆之前的设计阶段， 请选择不会切割目的基因的内切酶。
所需材料：
PCR的模版和引物， 质粒DNA，限制性内切酶。（最好是New England Biolabs Cutsmart 或者ThermoFisher 的 FastDigest 内切酶）。
以下的内切酶已确认和我们的产品匹配： ApaI, BamHI, EagI, EcoRI, EcoRV, HindIII, KpnI, SalI, SmaI, XmaI, NcoI, Not I, NdeI, NheI, PstI, SpeI, SacI, StuI, XbaI, XhoI.
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产品简介
ExSembly 是一种快速高效克隆PCR 产物到质粒的技术。 该技术无需提前酶切和提纯载体DNA。在该技术的缓冲液系统里， DNA内切酶， 外切酶， 和连接酶的活力高度优化协调， 一步完成环状质粒和目的基因的连接。内切酶持续的降解环状质粒， 有效降低了假阳性率 （< 5%）。绝大部分常用内切酶适用该技术。
图片资料
操作步骤
- 在冰上或低温下融化两倍的反应混合物。 第一次融化后分装成10 μL每管。
- 请按照表中建议进行反应操作：
| 载体和1-2个PCR片段 | 载体和3-5个PCR片段 | |
| 载体：PCR片段比例 | 1: ≥3 | 1:1 (每个插入片段) |
| 0.03-0.15 pmol 的质粒DNA | X μL | X μL |
| 纯化的PCR片段 | Y μL | 总体积 Y μL |
| 两倍的反应混合物 | 10 μL | 10 μL |
| 内切酶 | 1-2 μL | 1-2 μL |
| 纯净水 | 8 或9-（X+Y）μL | 8 或9-（X+Y）μL |
| 总体积 | 20 μL | 20 μL |
- 37 ℃孵育15 分钟， 然后50 ℃孵育15-45 分钟。
- 转化大肠杆菌感受态细胞。
