产品概述
本试剂盒适用于各种 RNA 制品的反转录反应以及随后的 PCR 扩增。它采用 M-MLV 进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物。同时，在 20ul 反转录体系和 50ul PCR 反应体系中，还可以一次性得到足够量的 PCR 产物用于后续的克隆实验。
本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT 酶采用进口的 M-MLV，所以 cDNA 更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的 RNase 抑制剂可有效降低由于外源 RNase 污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于 cDNA 克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
操作步骤
一、反转录反应
1、在冰浴的无 RNase 的离心管中加入如下反应成分：
1-5ug 总 RNA 或 50-500ng mRNA
2ul Oligo(dT)16或 2 pmole 基因特异性引物
补 RNase-free ddH2O 至 14.5ul
2、70℃保温 5min 后迅速在冰上冷却 2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：
4ul 5×M-MLV Buffer
1ul dNTPs
0.5ul RNasin
1ul M-MLV
3、42℃温浴 60min，如果是用随机引物，请先将离心管置 25℃温浴 10min，再 42℃温浴 60min。
4、95℃加热 5min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。
5、用 RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到 50ul，取 2-5ul 进行 PCR 反应。
二、PCR 反应
1、按以下各组分配制 50ul PCR 反应体系：
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物（用户自备 10um） 1ul
下游引物（用户自备 10um） 1ul
RT 反应产物 2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul
2、混匀后短暂离心，PCR 仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。
相关文献
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