通用 RT-PCR 试剂盒 (AMV)

操作步骤

一、反转录反应
1、在冰浴的无菌无 RNase 的离心管中加入如下反应成分：
0.5ug RNA 模板
5ul Oligo(dT)16引物
补 RNase-free ddH2O 至 11.5ul
2、70℃保温 5min 后迅速在冰上冷却 5min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：
5ul 5×AMV Buffer
2.5ul dNTPs
0.5ul RNasin
0.5ul AMV
补 RNase-free ddH2O 至 25ul
3、42℃温浴 60min，如果是用随机引物，请将离心管置 37℃温浴 60min。
4、反应后将离心管置冰上，反应产物可用于进行后续实验或-20℃保存。
二、PCR 反应
1、按以下各组分配制 50ul PCR 反应体系：
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物（用户自备 10um） 1ul
下游引物（用户自备 10um） 1ul
RT 反应产物 2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul
2、混匀后短暂离心，PCR 仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。