jetPRIME®（通用型DNA/siRNA转染试剂）（品牌：Polyplus）

常见问题

1、jetPRIME®是哪种类型的化合物？

jetPRIME®是由Polyplus-transfection®公司合成的专利产品，一种新型的基于阳离子聚合物的分子。

2、使用jetPRIME®进行转染时，质粒是如何导入的？

jetPRIME®和DNA形成带正电荷的复合物。这些复合物通过内吞作用进入细胞。随后经质子海绵作用，内涵体在细胞质中释放DNA。当有丝分裂过程中核膜消失时，质粒大多到达细胞核。

3、我的细胞比较脆弱，无血清时不能生长。我可以尝试在有血清的条件下进行转染吗？

与许多其他转染试剂相反，在有血清的环境下，jetPRIME®的效率更高。因此，转染复合物可以直接加到含血清培养基的细胞中。

无血清培养基：Opti-MEM培养基（thermo）

Lipo2000, 转染时需要更换培养为Opti-MEM; 需要用Opti-MEM复合物,转染6小时后需要换液。对细胞毒性大。

Lipo3000, 转染时需要更换培养为Opti-MEM; 需要用Opti-MEM复合物,转染6小时后无需换液。跟lipo2000相比，毒性小。

4、jetPRIME®的转染效率不受抗生素的影响。jetPRIME的常规批次质检都是在含血清和抗生素的培养基中进行的。

5、细胞密度和传代次数将影响转染效率。我们推荐细胞融合度在60%-80%。对于使用jetPRIME的转染优化条件，请参考jetPRIME®转染说明书中的Table 1，根据不同培养板推荐的细胞数。此外，如果细胞已经培养很长时间（超过20代），我们建议从液氮中取新的细胞重新培养。

6、DNA/jetPRIME®的比值是什么意思？

该比值指的是每微克（ug）DNA相对应的jetPRIME微升数（uL）。例如，DNA/jetPRIME®比值为1：2意思是每ugDNA加2uL jetPRIME.

7、对于给定细胞，能否提供其具体的转染条件？

请浏览Polyplus网站的细胞转染数据库，在这里可以找到许多细胞的具体转染条件

（http://www.polyplus-transfection.com/technical-resources/cell-line-database/）

8、优化的第一步是将DNA的量增加1.5倍。我们也推荐增加DNA/jetPRIME®比值（每ug的DNA， 2-3uL jetPRIME®）另一种方法是缓慢离心培养板（5min，210g）

9、一般来说，DNA的量应该和总细胞数成比例。参考jetPRIME protocol中的推荐，根据不同规格的培养皿，所需要的DNA和jetPRIME的量（Table 2）

10、对于所有细胞可以使用同样的条件吗？

已优化的操作步骤可用于多种细胞，例如A549, MCF7, U2OS, NIH-3T3, B16-F10, Caco-2等。但是，我们也提供了针对具体细胞的特异性操作步骤，以便获得更高的转染效率。这些具体的条件可以参见Polyplus cell transfection database.

11、是否可以提供使用jetPRIME转染HEK-293 和HeLa细胞的具体建议？

jetPRIME对于DNA转染HEK-293 和HeLa细胞都是非常高效的。因此，我们推荐减少DNA的量（例如6孔板，每孔1ug-0.5ug），使用1：2的DNA和jetPRIME比例。

12、jetPRIME®推荐用于悬浮细胞的DNA转染吗？

悬浮细胞，例如T和B淋巴细胞是众所周知的难转染DNA细胞，无论哪种化学方法的试剂都很难有较好的转染效率。因此，我们通常推荐电转或者病毒转染核酸到悬浮细胞。

13、jetPRIME®是否测试过可以用于植物细胞的转染？

植物细胞富含纤维素的膜阻止了jetPRIME/DNA复合物进入细胞。甚至在脱去纤维素的原生质体阶段，复合物也无法穿透进入细胞质。

14、jetPRIME®对HUVEC的DNA转染是否有效？

对于HUVEC细胞，我们推荐使用jetPEI®-HUVEC，专为该细胞的DNA转染设计的特异性转染试剂。

可以用jetOPTIMUS替代

15、对于原代培养的神经元，可以使用jetPRIME®吗？

神经元很难转染，主要是因为其在培养的过程中不分裂。然而，jetPEI®已被成功用于神经元的体外转染。我们的团队已经研发出DNA转染原代神经元的specific protocol。更多详情，请联系我们的技术支持。

可以用jetOPTIMUS替代

16、对于DNA转染巨噬细胞，jetPRIME的转染效率如何?

jetPRIME已成功用于Raw264.7的转染。按照standard condition, 可以获得50%的转染效率；对于原代巨噬细胞或单核细胞、巨噬细胞衍生的巨噬细胞的DNA转染，应选择jetPEI-macrophage.

可以用jetOPTIMUS替代

17、当我想在一个实验中进行多个质粒的共转染时，我该如何操作？

对于多个质粒的转染，每孔DNA的总量不应超过说明书中标明的DNA量。每个质粒的比例根据质粒的大小、结构和期望的每个质粒的表达水平来应用。在每孔中，每个质粒至少应占总DNA量的10%。

18、jetPRIME®/DNA复合物可以稳定多长时间？

复合物形成的15-30分钟内是获得最佳转染效率的时间。因此，对于需要较长孵育时间的高通量筛选，我们推荐使用jetPEI进行HTS,因为jetPEI®/DNA复合物可以稳定长达4小时。

19、jetPRIME®是否适用于病毒包装？

jetPRIME®可以用在传统培养基中进行病毒包装。实际上，在用于病毒包装的常规细胞中，使用jetPRIME®的转染效率可达90%，例如HEK-293及其衍生株，CHO, VERO, WOP和BHK细胞，因此会产生高病毒滴度（Dewannieux, M., Vernochet, C., Bartoscho, B., Cosset, F.L., Heidmann, T (2011). The mouse IAPE endogenous retrovirus can infect cells through any of the five GPI-anchored Ephrin A proteins., PLoS Pthog 7, e1002）.

20、如何提高脆弱细胞的细胞活性（例如，原代成纤维细胞）？

转染对于细胞来说是创伤事件。改进细胞活性，可参考以下建议：

-转染后4小时更换培养基

-减少DNA的量

-减少jetPRIME®的体积

-在含血清的培养基中进行转染

-转染后24小时分析转染效率而不是48小时

-确保使用jetPRIME® buffer稀释jetPRIME和DNA

-检测质粒不含内毒素

21、使用jetPRIME®做DNA转染会有质粒大小的限制吗？

使用jetPRIME®做DNA转染没有质粒大小的限制。然而， 记住同样的DNA量，大质粒的基因拷贝数比小质粒少。

22、可以使用jetPRIME®转染siRNA吗？

jetPRIME®完全可以用于siRNA转染，使用终浓度10-50nm的siRNA。然而，如果您主要感兴趣的是siRNA转染，那么试剂INTERFERin®是您的选择。

23、jetPRIME®如何保存？

jetPRIME®是稳定的分子。室温运输jetPRIME®和它的buffer，为长期保存，应储存在4°C。

24、当我收到jetPRIME®试剂时，管子完全是温的。它是否仍然有效，能否继续使用？

jetPRIME®是非常稳定的分子。我们已经做了测试jetPRIME试剂稳定性的实验。jetPRIME®在50°C放置48小时后，仍表现出和保存在4°C时相似的转染效率。

25、我不小心冻存了我的jetPRIME®试剂，我该怎么办？

jetPRIME®可以耐受偶尔的冷冻，而不影响转染效率。然而，对于长期保存来说，我们建议分装并储存在4°C，以确保试剂长时间有效。

26、jetPRIME保质期？

保存适当时，jetPRIME® cat#114-01 (0.1mL)可以保存6个月。其他规格的jetPRIME®至少可以保存1年。

27、我在哪里可以找到科研人员已成功使用jetPRIME®发表的文章？

在Polyplus product citation database, 可以找到引用jetPRIME和Polyplus-transfection 公司其他试剂的科研论文。

（产品资料及数据来源于Polyplus官网。）