实时荧光定量 PCR 试剂盒 (2×SYBR Green PCR Master mix)

试剂原理

本产品利用化学修饰热启动酶 HS Taq DNA polymerase 进行 qPCR 扩增反应，通过扩增产物嵌合 SYBR Green І 而激发的荧光信号强度进行检测。
1、PCR
PCR 法是以微量 DNA 进行目的片段扩增的方法。通过 DNA 链的热变性、引物退火、DNA 聚合酶作用下引物的延伸三个步骤循环往复，可在短时间内扩增大量 DNA 片段。
2、荧光检出
SYBR Green I 是一种结合于小沟中的双链 DNA 结合染料。与双链 DNA 结合后，其荧光大大增强，最大吸收波长约为 497nm，发射波长最大约为 520nm。SYBR Green I 可以与所有的双链 DNA 相结合，无需使用探针，即可实现检测，通用性好，且灵敏度很高。但是，由于 SYBR Green I 与所有的双链 DNA 相结合，因此由引物二聚体、单链二级结构以及错误的扩增产物引起的假阳性会影响定量的精确性。在定量仪器检测过程中，可以通过测量升高温度后荧光的变化，由解链曲线来分析产物的均一性，从而区分产物的融解峰温度而区分特异与非特异的产物。